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BC118-01	Stable 感受態細胞	20×100μl	420

產品信息：

儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。

產品介紹：

本公司生產的Stable感受態細胞是采用Stable菌株經特殊工藝制備得到的感受態細胞。Stable菌株特別適用于具有末端重復序列的逆轉錄病毒或慢病毒質粒的構建和擴增，也適用于重復DNA序列的克隆和擴增。Stable具有與Stbl3和Stbl4完全不同的基因型，比Stbl3和Stbl4生長速度更快，性能更好。核酸內切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高質粒DNA的產量和質量。ΔlacZM15基因的存在可用于藍白斑篩選。菌株還具有抗T1噬菌體感染的特點。Stable感受態細胞經pUC19質粒檢測轉化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

基因型：

F′ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15

e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

菌株抗性：對氨芐青霉素、氯霉素、卡那霉素、壯觀霉素和呋喃妥因敏感。具有四環素和鏈霉素抗性。

質粒轉化步驟：

1.將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入1-5μl含有1-100ng的質粒DNA或5-10μl連接產物到細胞中，用手指撥打管底，輕輕混勻。

2.冰水浴中放置30分鐘，不要晃動。

3.42℃熱擊60秒鐘，不要晃動。

4.冰水浴中放置2分鐘，不要晃動。

5.加入500μl的室溫的SOC或LB培養基。

6.置于37℃搖床中，150-200rpm震蕩復蘇培養60分鐘。

7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養12-18小時。

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質粒轉化，連接產物轉化最好用涂布法。）

（質?？焖俎D化步驟：將步驟2的時間縮短到5分鐘，對于氨芐青霉素抗性的質粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的質粒仍需60分鐘的復蘇培養。）