蛋白抽取與裂解
Benzonase Nuclease 全能核酸酶
發布者:博邁德生物發布時間:2021-04-012246
儲存溫度:
Benzonase Nuclease(250 U/μl)長期儲存于-80℃,可保存2年;或小量分裝后保存于-20℃,可保存1年,避免反復凍融。
產品介紹:
Benzonase Nuclease是來自Serratia marcescens,經基因工程改進的核酸內切酶。它能降解所有形式(包括單鏈,雙鏈,線性和環狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,在廣泛條件范圍下都能保持很高的穩定性和消化活力。它將核酸完全消化成3-5個堿基長度(雜交限度以下)的5’-單磷酸寡核苷酸,且不具有堿基識別特異性。Benzonase Nuclease迅速水解核酸的能力使該酶成為降低粘度以減少處理時間和增加蛋白產量的最佳選擇。本公司全能核酸酶無融合標簽。
產品應用:
1. 科研研究中,作為細胞裂解液去粘度的首選酶制劑,去除核酸干擾提高后續蛋白純化。
進行重組蛋白純化或者天然蛋白提取研究中,第一步就需要用裂解液對其進行裂解釋放蛋白,此時往往伴隨著大量的基因組DNA被釋放出來,很多并不是獨立存在的,往往與核蛋白以復合物的形式存在,導致提取物非常粘稠,呈鼻涕狀。蛋白提取過程中若不能很好處理這些粘稠基因組,會造成蛋白提取效率的降低和丟失。
若在加裂解液的同時加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶,可以很好的清除粗提物中的核酸,有效降低粘度,提高后續操作的效率。
2. 用于細胞培養來源產物的純化過程
核酸很容易粘附在病毒樣顆粒(VLP)、病毒粒子、包涵體等細胞生成顆粒的表面,使顆粒大小或電荷發生改變,造成這些顆粒的聚集。全能核酸酶可有效降解核酸,避免核酸對細胞產物的影響,利于提高細胞產物純化效率。
3. 用在生化分析樣品制備
ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程,使用Benzonase Nuclease處理含有核酸的蛋白樣品,可提高分辨率和回收率。
酶活性單位定義:
在37℃,pH8.0反應條件,2.625ml反應體系中,30min內使△A260吸收值變化1.0(相當于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸)所用的酶量定義為一個活性單位(U)。
操作方法:
1. 組織處理方法:將30-50 mg動植物組織研磨充分后,加入裂解液,同時加入1-5 μl Benzonase Nuclease,旋渦振蕩混合均勻,室溫孵育30 min。
2. 細胞處理方法:將懸浮細胞液離心收集后,棄掉上清液,使用裂解液重懸細胞,同時加入1-5 μl Benzonase Nuclease,旋渦振蕩混合均勻,室溫孵育 30 min。
3. 大腸桿菌細胞處理:將大腸桿菌培養液離心后,棄掉上清液,使用大腸桿菌裂解液重懸細胞,旋渦振蕩混合均勻,同時加入1-5 μl Benzonase Nuclease,室溫孵育30 min。
注意事項:
1. 產品的純度:≥ 90%(SDS-PAGE),滿足最基本的科研應用。
2. 酶活性值:≥250 U/μl。對于小體積制備物,可用稀釋緩沖液(20 mM Tris-Cl pH8.0, 2 mM MgCl2, 2 mM NaCl)稀釋到一定濃度,再加入體系中。稀釋后溶液可4℃保存幾天維持穩定。
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