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BC122-01	dam-/dcm-感受態細胞	20×100ul	420

儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。

產品介紹：

本公司生產的dam-/dcm-感受態細胞是采用大腸桿菌dam-/dcm-菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。dam-/dcm-菌株來源于大腸桿菌K12菌株，該菌株為dam和dcm甲基化酶失活突變型菌株，常用于質粒DNA的去dam和dcm甲基化處理，消除dam和dcm甲基化對酶切的影響。核酸內切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高質粒DNA的產量和質量。甲基化酶的失活突變可能會導致質粒DNA在該菌株中會出現突變，不建議連接產物的轉化實驗，僅用于質粒轉化。菌株還具有抗T1噬菌體感染的特點。pUC19質粒檢測轉化效率>×10⁶ cfu/μg DNA。

基因型：ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) Tet^S endA1 rspL136 (Str^R)dam13::Tn9 (Cam^R) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

菌株抗性：對氯霉素、鏈霉素有抗性；對氨芐青霉素、卡那霉素、壯觀霉素和四環素敏感。

質粒轉化步驟：

1.將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入1-5μl含有1-100ng的質粒DNA到細胞中，用手指撥打管底，輕輕混勻。

2.冰水浴中放置30分鐘，不要晃動。

3.42℃熱擊60秒鐘，不要晃動。

4.冰水浴中放置2分鐘，不要晃動。

5.加入500μl的室溫SOC或LB培養基。

6.置于37℃搖床中，150-200rpm震蕩復蘇培養60分鐘。

7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養12-18小時。

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質粒轉化，連接產物轉化最好用涂布法。）

（質?？焖俎D化步驟：將步驟2的時間縮短到5分鐘，對于氨芐青霉素抗性的質粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的質粒仍需60分鐘的復蘇培養。）